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螞蟻淘/Firefly Luciferase Assay Kit（螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒）/20T/F6024S
  • 螞蟻淘/Firefly Luciferase Assay Kit（螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒）/20T/F6024S

螞蟻淘/Firefly Luciferase Assay Kit（螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒）/20T/F6024S

價格: ￥264.00 市場價: 440.00
貨號: F6024S
品牌: ebiomall
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  • 使用說明
  • 常見問題
    • 產(chǎn)品概述：

      儲存條件-80℃保存。螢火蟲螢光素酶檢測液（B+C）混合液不可反復(fù)凍融，建議進行小批量分裝，并于-20℃（最長可儲存1個月）或-80℃（最長可儲存1年）條件下儲存。有效期見外包裝。

      組分

      規(guī)格

      F6024S（20T）

      F6024M（50T）

      F6024L（200T）

      F6024XL（1000T）

      A. 5×FireflyLuciferaseLysis Buffer

      2×1mL

      5mL

      20mL

      100mL

      B. FireflyLuciferase Assay Buffer

      2×1mL

      5mL

      20mL

      100mL

      C. D-Luciferin

      0.4 mg

      1 mg

      4 mg

      20 mg

      產(chǎn)品介紹真核基因表達調(diào)控研究常用的方法是進行報告基因的檢測，生物發(fā)光法又是報告基因檢測最常用的有效手段。螢光素酶能催化底物螢光素的轉(zhuǎn)化，并發(fā)射出光子。該產(chǎn)品為螢火蟲螢光素酶報告基因在哺乳動物細胞中的表達提供快速、靈敏、穩(wěn)定的檢測方法。能夠檢測最低10-20mol的螢光素酶，在10-14至10-20mol的酶濃度范圍內(nèi)呈很好的線性關(guān)系。產(chǎn)品特點1. 快速：細胞裂解在10-15 min內(nèi)完成。2. 方便：試劑易于配制，樣品檢測步驟簡單。3. 靈敏：能夠檢測最低10-20mol的螢光素酶。4. 酶的濃度線性范圍可達8個數(shù)量級。注意事項1. 溫度會對酶的活性產(chǎn)生影響，因此所有試劑應(yīng)放置室溫后再使用。2. 如果單管熒光測定儀測定，每個樣品與測定試劑混合后到測定前的時間應(yīng)保持一致。3. 螢火蟲螢光素酶催化的生物發(fā)光的最強波長為560 nm。4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

      說明書：UE-F6024S/F6024M/F6024L/F6024XL
      常見問題解答：◆檢測的螢光數(shù)值很低怎么辦？

      (1）可能為轉(zhuǎn)染效率低a.優(yōu)化轉(zhuǎn)染實驗條件，用較易轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒做陽性對照（如轉(zhuǎn)染過表達熒光蛋白質(zhì)粒）；b.確保轉(zhuǎn)染DNA的質(zhì)量，可通過酶切或瓊脂糖凝膠電泳的方法對DNA質(zhì)量進行鑒定；c.選擇活性較高，處于指數(shù)分裂期的細胞進行轉(zhuǎn)染。(2）可能為啟動子活性低或誘導(dǎo)失敗a.轉(zhuǎn)染后的細胞培養(yǎng)使用特異性誘導(dǎo)啟動子的條件；b.優(yōu)化細胞的培養(yǎng)條件，提高螢光素酶的表達量；c.更換強啟動子（如SV40、CMV）。注：海腎螢光素酶基因作為內(nèi)對照，其表達應(yīng)不受時期、部位、環(huán)境影響，因此常用組成型表達的TK啟動子。(3）樣品裂解效率低a.細胞培養(yǎng)時間不宜過長，12-36h內(nèi)最好，長時間培養(yǎng)后，細胞可能會難裂解。b.加入的裂解液需足量，保證細胞能夠充分裂解。(4）檢測過程操作不規(guī)范a.選擇合適的檢測儀器，能夠檢測化學(xué)發(fā)光或者生物發(fā)光的儀器都適用于該實驗；b.需加入足量底物，保證底物的飽和，否則會造成檢測結(jié)果出現(xiàn)很大偏差；c.室溫反應(yīng)。反應(yīng)時各個組分（細胞裂解產(chǎn)物，底物工作液等）都需要調(diào)整到室溫；d.螢光素酶的半衰期一般約30min，加完底物后可立即檢測，盡量在30min內(nèi)完成。(5）底物氧化失效a.底物避光密封保存，螢火蟲熒光素酶底物-20℃保存；海腎螢光素酶底物推薦-80℃保存；b.反應(yīng)工作液建議現(xiàn)用現(xiàn)配。◆進行檢測的過程中，螢光信號值太高該如何進行調(diào)整？（1） 減少質(zhì)粒轉(zhuǎn)染量。（2）細胞樣品裂解后，離心取上清后檢測或?qū)α呀猱a(chǎn)物進行稀釋后檢測。注：不建議通過減少底物量來降低熒光值，需要保證底物的飽和來反映螢光素酶真實的表達水平，否則會造成檢測結(jié)果出現(xiàn)大的偏差。
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