產(chǎn)品概述:儲(chǔ)存條件 -20℃ 避光保存,有效期見(jiàn)外包裝。開(kāi)封后,保存溫度詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。組分 規(guī)格 | 5T | 20T | 50T | 開(kāi)封后保存溫度 | 穩(wěn)定性 |
A.10 mM EdU | 100 μL | 0.4 mL | 1 mL | -20℃ | 開(kāi)封后按指定溫度保存可有效放置一年 |
B.YF? 488/555/594/647A Azide | 25 μL | 100 μL | 250 μL | -20℃,避光 |
C.10× Click-iT EdU反應(yīng)緩沖液 | 500 μL | 2×1 mL | 5 mL | 2-8℃ |
D.CuSO4 | 200 μL | 0.8 mL | 2×1mL | 2-8℃ |
E.Click-iT EdU緩沖液添加物 | 15 mg | 60 mg | 150 mg | 2-8℃ |
規(guī)格:上述反應(yīng)次數(shù)針對(duì)6孔板培養(yǎng)的細(xì)胞,不同容器的具體用量可參考附表1。熒光光譜數(shù)據(jù):YF? 488 Azide:495/519 nm;YF? 555 Azide:555/565 nm;YF?594 Azide:590/617 nm;YF? 647A Azide:650/670 nm.產(chǎn)品介紹細(xì)胞增殖檢測(cè)是評(píng)估細(xì)胞健康程度、遺傳毒性及抗腫瘤藥物效果的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)手段。檢測(cè)細(xì)胞增殖最精確的方法是 BrdU 法。EdU 法檢測(cè)試劑盒是BrdU法的革命性突破。EdU (5-乙炔基-2’-脫氧尿苷)是一種嘧啶類似物,在 DNA 合成期整合入 DNA 雙鏈。EdU 法檢測(cè)基于“點(diǎn)擊”反應(yīng),一種由銅催化的疊氮化合物和炔烴作用發(fā)生共價(jià)反應(yīng),形成共價(jià)鍵。本試劑盒中,EdU 含有炔烴,YF?488/555/647A Azide 染料含有疊氮化合物。點(diǎn)擊法的 EdU 標(biāo)記增殖快速有效,易于使用。BrdU 方法需要 DNA 變性(如酸變性、熱變性或者用 DNase 消化)暴露出 BrdU,方便 BrdU 抗體結(jié)合;而 EdU 法只需標(biāo)準(zhǔn)化的多聚甲醛固定和 Triton X-100 促滲就可以使檢測(cè)試劑進(jìn)入細(xì)胞,只需少量的疊氮化染料即可非常有效地標(biāo)記出整合的 EdU。本試劑盒包含EdU法檢測(cè)所需要的所有組分,可以用于體外培養(yǎng)細(xì)胞的增殖檢測(cè)。
常見(jiàn)問(wèn)題解答:◆YF?488/555/594/647有什么區(qū)別?
主要就是檢測(cè)EDU的物質(zhì)帶的熒光基團(tuán)不同,檢測(cè)時(shí)發(fā)射熒光的顏色不同。實(shí)驗(yàn)效果相同,可根據(jù)偏好或需求進(jìn)行選擇。◆EdU試劑盒中,固定后3% BSA in PBS的作用是什么?清洗步驟中,BSA可以終止掉未反應(yīng)的甲醛。◆能否在活細(xì)胞中進(jìn)行Click-iT EdU檢測(cè)?不可以。雖然EdU是對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行代謝標(biāo)記,但是疊氮化物檢測(cè)試劑和緩沖液組分是細(xì)胞非透過(guò)型,檢測(cè)信號(hào)時(shí)的Click反應(yīng)必須在固定和通透的樣品上進(jìn)行。◆質(zhì)粒轉(zhuǎn)染表達(dá)的熒光蛋白檢測(cè)與Click反應(yīng)兼容嗎?檢測(cè)順序是什么?本產(chǎn)品會(huì)影響GFP、RFP、mCherry等熒光蛋白的熒光,故染色后無(wú)法直接檢測(cè)GFP,建議使用GFP抗體間接檢測(cè)。◆觀測(cè)到較高的本底干擾,這是什么原因所致?如何減少本底干擾?疊氮化物和炔烴類間Click反應(yīng)非常有選擇性,生物體內(nèi)幾乎不可能有副反應(yīng)發(fā)生,所以本底較高一般是由洗滌不充分造成的。減少本底干擾的最佳方法是增加BSA洗滌的次數(shù)。同時(shí),也可在同樣的檢測(cè)條件下設(shè)置一組同等處理的無(wú)染料或無(wú)Click反應(yīng)對(duì)照,以排除自發(fā)熒光干擾。此外,您還可在無(wú)EdU 體系中進(jìn)行完整的Click反應(yīng),驗(yàn)證Click反應(yīng)信號(hào)的特異性。◆為什么標(biāo)記樣品無(wú)信號(hào)或特異性信號(hào)非常低?如何提高信號(hào)?1.請(qǐng)保證試劑使用時(shí)為無(wú)色的狀態(tài),不要使用已經(jīng)變黃的添加劑或緩沖液;2.為確保Click反應(yīng)試劑能夠到達(dá)核內(nèi),細(xì)胞需要充分地固定和通透;3.由于銅離子能結(jié)合到部分試劑上,這會(huì)導(dǎo)致催化Click反應(yīng)的有效濃度降低。所以在Click反應(yīng)前,不要在任何緩沖液或試劑中引入金屬螯合劑(例如EDTA、EGTA、檸檬酸鹽等),對(duì)某些含有這些物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)樣品來(lái)說(shuō),進(jìn)行Click反應(yīng)前,可能需要增加額外的洗滌步驟;4.當(dāng)銅離子在合適的化合價(jià)時(shí),Click反應(yīng)才有效。Click反應(yīng)中用到的銅離子為二價(jià)銅(Cu2+)。5.延長(zhǎng)Click反應(yīng)的時(shí)間至超過(guò)30分鐘也并不會(huì)提高信號(hào)。建議使用新鮮的Click反應(yīng)試劑再次進(jìn)行30分鐘的孵育,可更有效地提高標(biāo)記效率。◆如何對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染?試劑盒中配有Hoechst 33342,可以在Click反應(yīng)后用于細(xì)胞核的染色,也可選擇使用DAPI。◆可以用于檢測(cè)植物細(xì)胞核內(nèi)的DNA復(fù)制嗎?可以。EdU是小分子,可以穿透植物細(xì)胞的細(xì)胞壁。